細(xì)胞培養(yǎng)板使用過(guò)程中容易被忽視的“邊緣效應(yīng)”

邊緣效應(yīng)(Edge Effect)是指在利用96孔（或更多）培養(yǎng)板進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，處在周邊及四個(gè)角孔中的細(xì)胞通常會(huì)表現(xiàn)出異常的現(xiàn)象。

產(chǎn)生邊緣效應(yīng)的原因

1. 溫度：聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，將板從室溫（25℃左右）置于37℃的溫箱，隨著孔板升溫，在外周孔與中心孔之間可能存在熱力學(xué)梯度。

2. 蒸發(fā)：在培養(yǎng)箱經(jīng)常開(kāi)關(guān)的情況下，由于位置效應(yīng)，邊緣孔的濕度較中間孔更低，水分揮發(fā)的現(xiàn)象就更為嚴(yán)重。容易造成四周培養(yǎng)基的體積會(huì)明顯少于中間孔，而四個(gè)角落則更甚。對(duì)于長(zhǎng)時(shí)間周期的研究來(lái)說(shuō)，這是一個(gè)不容忽視的問(wèn)題——隨著培養(yǎng)基的蒸發(fā)，孔內(nèi)的培養(yǎng)基成分和藥物濃度將增加，這可能導(dǎo)致孔內(nèi)沉淀的出現(xiàn)?？着c孔之間的營(yíng)養(yǎng)物濃度、pH值也會(huì)影響基因和蛋白質(zhì)的表達(dá)，以及最終的細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)生變化。隨之而來(lái)的Western、PCR/qPCR、ELISA和其他應(yīng)用也就越不一致。

不推薦的應(yīng)對(duì)辦法

1. 留空：許多研究人員會(huì)通過(guò)避免使用邊緣孔來(lái)提高數(shù)據(jù)可重復(fù)性，比如使用96孔板，外圍的36個(gè)孔將被棄用（板的37.5%被浪費(fèi)）。因此，實(shí)驗(yàn)組須分布在多塊培養(yǎng)板上以達(dá)到足夠的通量，增加了工作量和成本，同時(shí)也降低了實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)板布局的靈活性。

2. 填充：PBS溶液、水或培養(yǎng)基填充外孔將有助于板的水合，限制蒸發(fā)，但這可能會(huì)成為細(xì)菌的滋生地。

3. 平鋪：當(dāng)堆疊起來(lái)的時(shí)候，處于頂部和底部的孔板將比中間的更快達(dá)到37℃，造成溫度梯度。但大多數(shù)培養(yǎng)箱被不止一個(gè)研究人員使用且空間有限，如果其他人選擇堆放，仍然會(huì)阻礙空氣流向你的樣品，影響溫度。

防止邊緣效應(yīng)的建議

1. 盡量縮短試驗(yàn)周期，從而減少液體在孔中儲(chǔ)存的時(shí)間，減少蒸發(fā)。

2. 使用低蒸發(fā)蓋帶冷凝環(huán)的蓋子。

3. 使用透明或鋁箔密封膠帶進(jìn)行生化測(cè)定，或使用透氣的無(wú)菌膠帶進(jìn)行細(xì)胞測(cè)定。